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清華大學醫學院郭永課題組合作在《Journal of Clinical Microbiology》發表文章,報道不同滅活方法對新型冠狀病毒核酸檢出率的影響 時間:2020-06-16

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新冠肺炎(COVID-19)目前在全世界多個國家爆發流行,新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)核酸檢測目前是實驗室病原檢測的金標準。為保護實驗室檢測人員不受感染,大多數實驗室使用滅活標本進行核酸檢測。西安市疾病預防控制中心馬超鋒團隊和清華大學醫學院郭永團隊合作,利用絕對定量的微滴數字PCR(ddPCR)技術檢測新冠病毒N基因和ORF 1ab基因,比較了TRIzol 試劑、不同溫度的熱滅活方法對臨床樣本中新型冠狀病毒基因拷貝數的影響,為實驗室選擇適宜滅活方法且提高檢出率提供了科學依據。該研究結果于5月28日在Journal of Clinical Microbiology發表(doi:10.1128/JCM.00958-20)。

該研究收集了61份新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)核酸檢測陽性的鼻咽拭子標本,采用了以下幾種滅活方法:1、TRIzol試劑在室溫下滅活10分鐘;2、在56℃水浴中加熱30分鐘;3、高溫處理,包括121℃高壓20分鐘、100℃沸水浴煮沸20分鐘、80℃水浴加熱20分鐘。該研究發現,與原始樣品中的RNA量相比,TRIzol處理破壞了47.54%的N基因和39.85%的ORF 1ab基因;56℃30分鐘加熱處理后,N基因和ORF 1ab拷貝數分別減少48.55%和56.40%;在80℃加熱20分鐘后,病毒RNA拷貝數下降了50-66%;121℃高壓滅菌或100℃煮沸20分鐘破壞了絕大部分病毒RNA,幾乎未檢測到病毒RNA。

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圖1. TRIzol室溫10分鐘處理對生物標本中新冠病毒基因拷貝數的影響

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圖2. 56℃加熱30分鐘處理對生物標本中新冠病毒基因拷貝數的影響

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圖3. 80℃、100℃及121℃加熱20分鐘處理對生物標本中新冠病毒基因拷貝數的影響

該研究結果表明,滅活降低了可檢測到的病毒RNA數量,尤其對于弱陽性標本,可能導致假陰性結果。相較于熱滅活,TRIzol處理對病毒核酸拷貝數影響更小,因此推薦使用TRIzol對臨床樣本進行滅活處理。

吳瑞、陳海龍、邢遠為該研究的共同第一作者,馬超鋒和郭永為該研究的共同通訊作者。該項目受到西安市新型冠狀病毒肺炎疫情應急防治專項項目、清華大學疫情防控科技攻關應急課題、北京市科委新冠肺炎應急項目、新羿生物等單位或項目的支持。

https://jcm.asm.org/content/early/2020/05/28/JCM.00958-20



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